Siçan beyninin Gαo‑zəngin subkortikal strukturlarına transgenlərin çatdırılması, GNAO1 ensefalopatisi üçün potensial tətbiqlərlə

Adeno-associated virus (AAV) vektorları klinikadan əvvəl aparılan tədqiqatlarda siçan beyninə transgenlərin çatdırılması üçün geniş istifadə olunur, lakin AAV metodologiyası hər bir nöroloji xəstəlik üçün özelleştirmə tələb edir. Bu tədqiqatda, GNAO1-nin yüksək ifadəsi olan beyin bölgələrinin AAV vasitəsilə transduksiyası üçün optimal yanaşmanı müəyyənləşdirmək məqsədi daşıyırdıq, bu da siqnallaşdırıcı qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplu qruplar üçün optimal yanaşma məqsədi daşıyırdıq. GNAO1- dən olan mutasiyalar nörodoqlomanın gNAO1- n encefalopatiyasına səbəb olur. Bütün beyin konfoqal görüntüləmədən istifadə edərək, biz böyük siçan beynindəki hüppokampal CA2 sahəsinin ən yüksək sıxlığı olan Gαo-pozitik nevronal somataları, striyatum, talamus, cerebelli Purkinje hüceyrə qatı və piramida qatını müəyyən etdik. Biz vahşi siçanlarda fluorescent reporterləri ifadə edən nevrotropik AAV-ların intracerebroventrikulyar və intravenous tətbiqini müqayisə etdik. Yeni doğulmuş siçanlara intracerebroventricular enjeksiya dərin Gαo zəngin beyin bölgələrinə zəif nüfuz gətirib çıxardı. Əksinə, AAV9-un yetişkin siçanlarda geri orbital tətbiqi Gαo- pozitiv kortikal və kortikal alt bölgələrdə vahid vektor tədarükünə səbəb oldu. AAV9 variantı Y446F/Y731F üçün Gαo siqnallaşdırmasında iştirak edən dopaminergik və GABAergik yolların nevronlarına transgenlərin çatdırılmasını göstərdik. GFAP-pozitiv hüceyrələrə aşağı tropizmlə. Nəhayət, endogen Gnao1-i susdurmaq və əvəz GNAO1-in transgenini ifadə etmək üçün hazırlanmış iki funksiyalı vektor təqdim etmək üçün AAV9-Y446F/Y731F istifadə etdik. In vitro testlər uğurlu olmasına və beyin çatdırılması gözləntilərə cavab versə də, transgen ekspressiyası aşağı qalmış və bu da ekspressiya kasetin yaxşılaşdırılması ehtiyacını göstərir. Birlikdə, tapıntılarımız sıçan beyninin Gαo zəngin bölgələrini hədəfləmək üçün təsirli bir AAV strategiyasını müəyyənləşdirir və GNAO1 encefalopatiyası üçün gen terapiyasının inkişafına dəstək verir.

Silence-and-Replace AAV vektorunun klonlanması və sınaqları Rusiya Elm Fondunun 2325-00323 layihəsi tərəfindən maliyyələşdirildi.

Erməni xəstəliklərin modelləşdirilməsi və gen terapiyası laboratoriyası, Gen Biologiya İnstitutu, Rusiya Elmlər Akademiyası, Moskva, Rusiya

Svetlana G. Vassilieva, Evgeniya A. Lunev, Ali Yousef, Anna V. Polikarpova, Marina A. Dzenkova, Anna A. Şmidt, İvan I. Galkin, Vyacheslav A. Loginov, I. Aleksandr. Dokuçayeva, V. Tatiana. Egorova & Maryana V. Bardina

Svetlana G. Vassilieva, Evgeniya A. Lunev, Anna V. Polikarpova, İrina M. Savçenko, Marina A. Dzenkova, Anna A. Şmidt, İvan I. Galkin, Vyacheslav A. Loginov, I. Aleksandr. Dokuçayeva, Anna Karan, Denis A. Reshetov, V. Tatiana. Egorova & Maryana V. Bardina

Koltzov İnkişaf Biologiya İnstitutu, Rusiya Elmlər Akademiyası, Moskva, Rusiya